普利莱 细胞 膜蛋白提取试剂盒 货号: P1203-50（厂家直销批发）

普利莱 细胞 膜蛋白提取试剂盒 货号: P1203-50

货号	产品名称	规格	目录价（元）
P1203-50	细胞 膜蛋白提取试剂盒	50次	560
P1203-100	细胞 膜蛋白提取试剂盒	100次	960

描述：本试剂盒能够从哺乳动物新鲜或冻存的组织块、贴壁或悬浮细胞中制备细胞 膜与胞内质膜组分。其独特的试剂成分与优化的制备方案使胞膜制备过程简单易行，无需特殊设备和超速离心，可在1小时内完成。应用本试剂盒制备的胞膜是细胞 膜和细胞器膜如线粒体、内质网及质膜的混合物。制备得到的产物纯度可胜任后续的免疫沉淀、蛋白印迹、2-D gel、酶活性检测和受体分析等实验。

组成：（以下是50次规格用量）

CER(Cytosol Extraction Reagent) 25ml

MER(Membran Extraction Reagent) 2.5ml

Suspension Buffer 10ml

储存：各组分4 oC有效期12个月

操作步骤：

一．样本预处理：

收集细胞：（在每一次制备过程中，使用等量的细胞数将明显提高后续检测结果的一致性，因此建议在制备前对细胞准确计数）

1.贴壁细胞：用PBS缓冲液冲洗细胞平皿，用胰蛋白酶消化细胞。800g离心5-10分钟，弃上清，用PBS缓冲液重悬洗涤细胞并再次离心收集细胞。

2.悬浮细胞：800g离心5-10分钟，弃上清。用PBS缓冲液重悬洗涤细胞并再次离心收集细胞。

以下制备过程要在4 oC或冰水浴中进行

二．组织细胞匀浆裂解

1.细胞匀浆裂解

向每1x107个细胞或每100μl（细胞离心后的体积）细胞沉淀中加入500μlCER试剂，震荡重悬，冰浴2分钟。将细胞悬液转移到冰预冷的玻璃匀浆器内，在冰水浴中上下手动匀浆20-30次。

注意：此破碎细胞步骤为关键环节。要使用1-3ml小容积玻璃匀浆器，须选用间隙严密的研杵，其特征是将研杵插入匀浆器套管后，可提起研杵而套管不会脱落。有效研磨是上下推拉而不是旋转。破碎效果与细胞类型有关，可在相差显微镜下检查，未裂解细胞应小于5%。

2.组织块匀浆裂解：

取250mg哺乳动物新鲜或-80 oC冻存组织块放入冰预冷的玻璃匀浆器内，加入500μlCER试剂。用研杵捣碎组织块，上下手动匀浆20次，冰浴10分钟，然后上下手动匀浆7次。

注意：与培养细胞特别是贴壁细胞相比，组织块中的细胞在匀浆时较易破碎，因而并非必须选择间隙严密的研杵。如果研杵与套管过于严密，会使组织匀浆困难，可选用研杵与套管稍松的匀浆器，破碎效果与组织细胞类型有关，可在相差显微镜下检查，未裂解细胞应少于5%。

三、粗提物制备：

取约500μl裂解物，转移到新的离心管中，800g ,4oC离心5分钟。上清为胞膜-胞浆混合物。

四、胞膜胞浆制备：

1）将步骤三获得的上清转移到新的离心管中，估计上清的体积； 2）加入上清液1/10体积的MER与上清液混合，冰浴5分钟；3）14,000rpm，4oC离心30分钟；4）沉淀为胞膜组分，含有细胞 膜和亚细胞器碎片，可短暂离心除尽液体，用50-100μl Suspension Buffer重悬备用或用RIPA裂解胞膜；做WB时膜蛋白分子量100KD以上的建议用较强的蛋白提取试剂如加强的RIPA，便于获取溶解度低的膜蛋白，具体方案根据试验目的确定。

说明：

1.Suspension Buffer不含去垢剂，重悬于Suspension Buffer中的胞膜或胞核组分呈不溶解状态是正常的，用户可用自备溶液重悬胞膜或胞核成分。如果进行蛋白印迹、2-D get等实验，用户可用SDS上样缓冲直接裂解细胞 膜或细胞核成分。对于进行免疫共沉淀实验来说，可用RIPA裂解液（C1053）重悬胞膜。

2.试剂盒各组分中未添加蛋白酶抑制剂，可自行选择添加。

以下仅列举数篇使用普利莱P1203试剂盒发表的文章供参考。

1、Wu S, Yue Y, Tian H, et al. Tramiprosate protects neurons against ischemic stroke by disrupting the interaction between PSD95 and nNOS[J]. Neuropharmacology, 2014, 83: 107-117.

2、Xu S, Wang P, Wei K, et al. Cytoprotection of perfluorocarbon on pmvecs in vitro[J]. Inflammation, 2013, 36(2): 512-520.

3、Yao X, Chen H, Li Y. Protective effect of bicyclol on liver injury induced by hepatic warm ischemia/reperfusion in rats[J]. Hepatology Research, 2009, 39(8): 833-842.

4、Yan S, Zhou C, Zhang W, et al. β-Catenin/TCF pathway upregulates STAT3 expression in human esophageal squamous cell carcinoma[J]. Cancer letters, 2008, 271(1): 85-97.

5、Shi L L, Yang W N, Chen X L, et al. The protective effects of tanshinone IIA on neurotoxicity induced by β-amyloid protein through calpain and the p35/Cdk5 pathway in primary cortical neurons[J]. Neurochemistry international, 2012, 61(2): 227-235.

6、Yang X Y, Zhao N, Liu Y Y, et al. Inhibition of NADPH oxidase mediates protective effect of cardiotonic pills against rat heart ischemia/reperfusion injury[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2013, 2013.

7、Song X Y, Xu S, Hu J F, et al. Piperine prevents cholesterol gallstones formation in mice[J]. European journal of pharmacology, 2015, 751: 112-117.

8、ZHAO H A I P, Feng J, Sun K, et al. Caffeic Acid Inhibits Acute Hyperhomocysteinemia‐Induced Leukocyte Rolling and Adhesion in Mouse Cerebral Venules[J]. Microcirculation, 2012, 19(3): 233-244.

9、Hao H F, Liu L M, Liu Y Y, et al. Inhibitory effect of rhynchophylline on contraction of cerebral arterioles to endothelin 1: Role of rho kinase[J]. Journal of ethnopharmacology, 2014, 155(1): 147-153.

10、Li A Q, Zhao L, Zhou T F, et al. Exendin-4 promotes endothelial barrier enhancement via PKA-and Epac1-dependent Rac1 activation[J]. American Journal of Physiology-Cell Physiology, 2015, 308(2): C164-C175.

11、Zhao L, Li A Q, Zhou T F, et al. Exendin-4 alleviates angiotensin II-induced senescence in vascular smooth muscle cells by inhibiting Rac1 activation via a cAMP/PKA-dependent pathway[J]. American Journal of Physiology-Cell Physiology, 2014, 307(12): C1130-C1141.

12、Tai W, Ye X, Bao X, et al. Inhibition of Src tyrosine kinase activity by squamosamide derivative FLZ attenuates neuroinflammation in both in vivo and in vitro Parkinson"s disease models[J]. Neuropharmacology, 2013, 75: 201-212.

13、Wang Q, Lin Y, Zhang W, et al. Lead induces dysregulation of iron regulatory protein 1 via the extracellular signal-regulated kinase pathway in human vascular endothelial cells[J]. Brain research, 2012, 1455: 19-27.

14、Miao Y, Dong L D, Chen J, et al. Involvement of calpain/p35-p25/Cdk5/NMDAR signaling pathway in glutamate-induced neurotoxicity in cultured rat retinal neurons[J]. PloS one, 2012, 7(8): e42318.

15、Liu X D, Yang J J, Fang D, et al. Functional Upregulation of Nav1. 8 Sodium Channels on the Membrane of Dorsal Root Ganglia Neurons Contributes to the Development of Cancer-Induced Bone Pain[J]. PloS one, 2014, 9(12): e114623.

16、Liu M, Yang H, Fang D, et al. Upregulation of P2X3 receptors by neuronal calcium sensor protein VILIP-1 in dorsal root ganglions contributes to the bone cancer pain in rats[J]. Pain, 2013, 154(9): 1551-1568.

普利莱APPLYGEN常用抗体列表：

… … …等等