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北京普利莱基因技术有限公司
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公司官网: www.applygen.com
所在地区:北京市 市辖区
主营产品: 各种生化指标测定试剂盒、WB蛋白相关所有试剂、抗体、转染试剂、染色液
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品牌 | 普利莱 | 产品品牌 | APPLYGEN |
产品名称 | 普利莱 高脂样本甘油酶法测定试剂盒(适用肝脏、脂肪细胞) | 英文名称 | 无 |
产品规格 | 105次 | 储存 | 具体根据说明书操作 |
储存周期 | 根据说明书具体操作 | 供货能力 | 现货 |
可售卖地 | 全国 | 用途 | 科研实验专用 |
货号 | E1024-105 |
货号 | 产品信息 | 规格 | 报价(元) |
E1024-105 | 高脂样本甘油酶法测定试剂盒(适用肝脏、脂肪细胞) | 105次 | 1180 |
描述:甘油是甘油三酯的水解产物。与游离脂肪酸一样,甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标,但检测更加方便。本试剂盒采用优化步骤,能够检测实体组织、细胞中的甘油含量,线性范围为10-1200μmol/L。
原理:在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢;在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺,其光密度值与甘油浓度成正比。
适用范围:测定实体组织、细胞中的甘油浓度。
组成(105次微板测定或30次1 ml比色杯测定):
(1) 裂解液 100 ml
(2) R1试剂 16 ml
(3) R2试剂 4 ml
(4) 4 mmol/L甘油标准品1 ml
4 oC保存 6个月有效
所需设备:酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。最佳工作波长550nm,如无此波长建议优先选用570nm、次选530、490nm。
一组织细胞裂解
细胞(包括分化的脂肪细胞)裂解:
消化、离心收集细胞。或直接在培养皿内裂解。通常6孔板单孔约2x106个细胞,75cm2瓶约1x107细胞。按比例每1~2 x 106细胞加0.1ml裂解液,震荡或涡旋裂解后,静置10分钟。
动物组织裂解:
切记要预先将新鲜组织剪切称重后再进行保存。组织冻存后再进行解冻、剪切、称重可能会产生严重的测量误差。离心管精确称重,加入组织块后再称重,二者相减(即减量称重法)计算组织重量(约100mg)。强烈建议按比例每1mg组织加10μl裂解液以减少样品间蛋白和脂质含量变异而产生的误差。(注意;裂解液用量在1ml或更多可保证有效的裂解与脂质提取)。用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器破碎组织。(不推荐超声方法,因其不能完全和均匀破碎。应根据预实验调整初始的组织细胞加入量),而后,静置10分钟。
二.裂解液处理:
1. 取适量上清液转移到1.5ml离心管中,进行步骤2的操作。余下的裂解液可用BCA法蛋白定量试剂盒(#P1511)进行蛋白定量或-20oC储存。
2. 70oC 加热10分钟灭活脂肪酶,可能出现絮状沉淀。
3. 室温5000rpm离心5分钟,上层清液即可用于酶学测定。
三工作溶液配制:按4:1比例,取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合即可,立即使用或4oC保存1天,变色弃去。(注意:谨防来源不明但容易发生的甘油污染,可来自操作者本人或标准品液体微粒溅射等。)
四标准品稀释:用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将4 mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μmol/L,通常取其中4~6管即可,注意设置0浓度对照反应管。
五甘油测定
1. 参见下表加样。待测样品体积10μl,多加可能会抑制反应。
2. 37oC或25oC反应 10分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。
3. 先用蒸馏水 工作液的空白管调零,然后测定各管OD值。
4. 绘制标准曲线并计算甘油浓度。
附Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-和-R2值-。
5. 以每mg蛋白浓度或细胞数校正甘油含量。
加样表(可对样品和工作液比例进行微量调整)
96孔微板测定 |
1 ml比色杯测定 |
|||||
空白管 |
标准品 |
样品 |
空白管 |
标准品 |
样品 |
|
蒸馏水μl |
10 |
35 |
||||
标准品μl |
10 |
35 |
||||
样品μl |
10 |
35 |
||||
工作液μl |
190 |
190 |
190 |
665 |
665 |
665 |
说明:
1. 维生素C0.18g/L、血红蛋白2g/L、胆红素0.25g/L、二硫苏糖醇、巯基乙醇、高浓度EDTA干扰测试。
2. 红细胞糖酵解时合成磷酸甘油影响测定。
参考文献:
1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 1
北京普利莱基因技术有限公司
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公司地址:
首科凯奇大厦
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