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上海抚生实业有限公司
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主营产品: elisa试剂盒、PCR检测试剂盒、标准品、菌种、科研抗体、生化试剂
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基本参数
品牌 | 抚生 | 产地 | 进口、国产 |
保质期 | 24个月 | 级别 | 试验试剂LR |
产品名称 | 电子转移黄素蛋白β肽/黄素蛋白 | 英文名称 | Anti-ETFB |
规格 | 0.2ml/200μg | 浓 度 | 1mg/1ml |
抗体来源 | Rabbit | 货号 | FS-K6400 |
标记抗体的原理:
电子转移黄素蛋白β肽/黄素蛋白抗体FITC异硫氰酸荧光素是目前较为常用的标记抗体的方法,FITC一般呈黄色、褐色或褐黄色粉末或结晶,性质稳定在低温中能保存数年。在碱性条件下,FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基共价结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个抗体分子上最多能标记15~20个FITC分子,被标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力,在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光,通过荧光显微镜进行观察或利用流式细胞仪分析,从而对抗原进行定性、定位或定量。
别 名 Flavoprotein; Beta ETF; FP; Beta-ETF; Electron transfer flavoprotein beta polypeptide; Electron transfer flavoprotein beta subunit; Electron transfer flavoprotein subunit beta; Electron transferring flavoprotein beta polypeptide; etfB; ETFB_HUMAN; FP585; MADD.
英文名称 Anti-ETFB
中文名称 电子转移黄素蛋白β肽/黄素蛋白抗体
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow
产品类型 一抗
研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导 转录调节因子 线粒体
蛋白分子量 predicted molecular weight: 28kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ETFB
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
直接标记法:
抗体的准备:取提纯的Ig溶液测定蛋白质含量,置于三角烧瓶中加入生理盐水和0.5mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液,冰槽中搅拌5~10min;
荧光素的准备:按每毫克蛋白质加0.01~0.02mg的FITC计算,准确称取后加入抗体溶液中;
标记:边搅拌边加入荧光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰库继续搅拌12~18h;
透析:结合完毕后,先将结合物以3000r/min离心20min,除去少量沉淀物后装入透析袋中再置于pH8.0缓冲盐的烧杯中透析过夜;
过柱:取透析过夜的标记物,过葡聚糖凝胶G-25或G-50柱,分离游离的FITC,收集标记的荧光抗体进行鉴定。
间接标记法:
抗体的准备:0~4℃下,用0.01mol/L pH8.0 PBS将待标记的抗体蛋白溶液稀释到浓度为30~40mg/ml,置于三角烧瓶内放入冰槽中;
荧光素的准备:按每毫克蛋白质加入0.01mg的荧光素称取,溶解于等量的3%重碳酸钠水溶液中;将抗体蛋白溶液与FITC溶液等量混合,在0~4℃中搅拌18~24h,充分搅匀;
透析或过柱层析。
改良法:
抗体的准备:取提纯的Ig溶液测定蛋白质含量,置于三角烧瓶中加入生理盐水和0.5mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液,冰槽中搅拌5~10min;
荧光素的准备:按每毫克蛋白质加0.01~0.02mg的FITC计算,准确称取后加入抗体溶液中;
标记:边搅拌边加入荧光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰库继续搅拌12~18h;
用半饱和硫酸铵将标记的抗体蛋白沉淀分离,3000r/min离心30min,倾去上清液中的游离荧光素,再用缓冲盐水透析除去硫酸铵。将制备好的荧光抗体加0.01%NaN3,分装保存。
透析法:
用0.025mol/L PH9.2碳酸盐缓冲液,将待标记的抗体蛋白稀释成1%浓度,装入透析袋中;
用同一缓冲液将FITC制成0.1mg/ml的溶液,置于圆形容器内,并将透析袋浸没其中,4℃搅拌24h;
取出透析袋中标记液。立即过葡聚糖凝胶G-25或G-50柱,除去游离荧光素,收集荧光抗体进行鉴定。
抗体的结构:
抗体是具有4条多肽链的对称结构,其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链);2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种,重链有μ、δ、γ、ε和α五种。 整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。在给定的物种中,不同抗体分子的恒定区都具有相同的或几乎相同的氨基酸序列。可变区位于"Y"的两臂末端。在可变区内有一小部分氨基酸残基变化特别强烈,这些氨基酸的残基组成和排列顺序更易发生变异区域称高变区。高变区位于分子表面,最多由17个氨基酸残基构成,少则只有2 ~ 3个。高变区氨基酸序列决定了该抗体结合抗原抗原的特异性。一个抗体分子上的两个抗原结合部位是相同的,位于两臂末端称抗原结合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部称结晶片段(crystalline fragment,FC),糖结合在FC 上。
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