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伊势久生物 神经HRP示踪显色液(DAB法) 50T 科研专用

价格 507.00/瓶
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000瓶

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基本参数

纯度 / 规格 50T
品牌 伊势久 用途范围 生化研究
包装类型 保质期 —20℃,避光,12个月
产品规格 50T 产品名称 神经HRP示踪显色液(DAB法)
产品用途 生化研究 名称 神经HRP示踪显色液(DAB法)

神经PHRP示踪显色液B (DAB )

简介:

个世纪70年代,KristensopnOlsson报道了HRP可经神经末梢摄取,经轴浆逆行运输至神经元胞体,经组织化学方法可显示出神经元的轮廓,从而开发出HRP追踪神经元示踪技术,即为HRP法。DAB3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下, DAB会产生棕色沉淀,该棕色沉淀不溶于水和乙醇,显色后呈棕色,可在显微镜下观察。神经HRP示踪显色液(DAB)是动物经麻醉、注入HRP后,游离或络合型的HRP不氧化剂反应生成络合物,该络合物氧化供氢的DAB显色剂,呈棕色,在显微镜下清晰可见。该显色液仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

组成:

产品名称

SN023-50T

Storage

试剂(A): DAB assay buffer

2×500ml

RT 避光

试剂(B): DAB显色液

30ml

-20℃ 避光

试剂(C): DAB增强剂

2×1ml

RT

试剂(D): DAB Wash buffer(20×)

100ml

RT

说明书

一份

保存条件

-20℃,避光保存,12个月有效。

操作步骤(仅供参考)

() 、准备工作

1、动物麻醉:多用(3.5%)戊巴比妥钠作为麻醉剂,大鼠的麻醉剂量为0.25-0.35ml/100g

2、导入HRP:有压力注射法、电泳法以及周围神经系统的注射涂抹等法。

3、确定动物存活期。

4、动物灌注:麻醉后,经左心室升主动脉插管行心内灌注固定。先用生理盐水或PBS快速灌注。随后用4%的多聚甲醛固定液灌注,先快后慢,时间控制在30-40min。最后用10%蔗糖磷酸缓冲液(pH7.4)

5、取材:取组织置于20%的蔗糖磷酸盐缓冲液中,切片厚度40μm,存于蔗糖磷酸盐缓冲液备用。

() 、显色反应

1、配制DAB孵育液:取适量的DAB assay bufferDAB显色液,按DAB assay bufferDAB显色液=39:1的比例混合,即为DAB孵育液,即配即用,不宜保存。

2、 配制DAB显色工作液:取适量的DAB孵育液和DAB增强剂,按DAB孵育液:DAB增强剂=2000

80001的比例混合(具体比例应根据具体时间摸索确定),即为DAB显色工作液,即配即用,不宜保存。

3、配制1×DAB Wash buffer:取适量的DAB Wash buffer(20×),按DAB Wash buffer:蒸馏水=1:19的比例混合,即为1×DAB Wash buffer。室温保存,6月有效。

4、切片用蒸馏水清洗3次,每次2min

5、切片入10ml DAB孵育液(提前20℃温育),避光孵育20min,其间不断晃动。

6、切片入10ml DAB显色工作液(提前20℃温育),避光孵育20min,其间不断晃动。

7、漂洗:取10ml左右的1×DAB Wash buffer漂洗切片2-3次,每次5min

8、贴片,载玻片用铬明矾明胶包被,室温空气干燥。

9、脱水、透明步骤按如下操作: 蒸馏水 10s ②70%乙醇 10s ③95%乙醇 10s ④100%乙醇 2次,每次10s ⑤二甲苯 2次,每次25min

10、中性树胶封片,显微镜下观察棕色反应。

注意事项:

1. 如果出现高的反应背景或沉淀,表明DAB底物反应过于强烈。

2. 所用器皿必须洁净,避免含有氧化剂或还原剂,否则会产生非特异性反应。

3. DAB显色液避免反复冻融,以免显色效率下降。

4. DAB增强剂注意密闭保存,否则显色效率下降。

5.本产品仅由于科研,严禁他用。

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