伊势久生物 神经HRP示踪显色液(DAB法) 50T 科研专用
价格 | ¥507.00/瓶 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000瓶 |
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基本参数
纯度 | / | 规格 | 50T |
品牌 | 伊势久 | 用途范围 | 生化研究 |
包装类型 | 瓶 | 保质期 | —20℃,避光,12个月 |
产品规格 | 50T | 产品名称 | 神经HRP示踪显色液(DAB法) |
产品用途 | 生化研究 | 名称 | 神经HRP示踪显色液(DAB法) |
神经PHRP示踪显色液B (DAB 法)
简介:
个世纪70年代,Kristensopn和Olsson报道了HRP可经神经末梢摄取,经轴浆逆行运输至神经元胞体,经组织化学方法可显示出神经元的轮廓,从而开发出HRP追踪神经元示踪技术,即为HRP法。DAB即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下, DAB会产生棕色沉淀,该棕色沉淀不溶于水和乙醇,显色后呈棕色,可在显微镜下观察。神经HRP示踪显色液(DAB法)是动物经麻醉、注入HRP后,游离或络合型的HRP不氧化剂反应生成络合物,该络合物氧化供氢的DAB显色剂,呈棕色,在显微镜下清晰可见。该显色液仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
产品名称
|
SN023-50T
|
Storage
|
试剂(A): DAB assay buffer
|
2×500ml
|
RT 避光
|
试剂(B): DAB显色液
|
30ml
|
-20℃ 避光
|
试剂(C): DAB增强剂
|
2×1ml
|
RT
|
试剂(D): DAB Wash buffer(20×)
|
100ml
|
RT
|
说明书
|
一份
|
保存条件:
-20℃,避光保存,12个月有效。
操作步骤(仅供参考):
(一) 、准备工作
1、动物麻醉:多用(3.5%)戊巴比妥钠作为麻醉剂,大鼠的麻醉剂量为0.25-0.35ml/100g。
2、导入HRP:有压力注射法、电泳法以及周围神经系统的注射涂抹等法。
3、确定动物存活期。
4、动物灌注:麻醉后,经左心室升主动脉插管行心内灌注固定。先用生理盐水或PBS快速灌注。随后用4%的多聚甲醛固定液灌注,先快后慢,时间控制在30-40min。最后用10%蔗糖磷酸缓冲液(pH7.4)。
5、取材:取组织置于20%的蔗糖磷酸盐缓冲液中,切片厚度40μm,存于蔗糖磷酸盐缓冲液备用。
(二) 、显色反应
1、配制DAB孵育液:取适量的DAB assay buffer和DAB显色液,按DAB assay buffer:DAB显色液=39:1的比例混合,即为DAB孵育液,即配即用,不宜保存。
2、 配制DAB显色工作液:取适量的DAB孵育液和DAB增强剂,按DAB孵育液:DAB增强剂=2000~
8000:1的比例混合(具体比例应根据具体时间摸索确定),即为DAB显色工作液,即配即用,不宜保存。
3、配制1×DAB Wash buffer:取适量的DAB Wash buffer(20×),按DAB Wash buffer:蒸馏水=1:19的比例混合,即为1×DAB Wash buffer。室温保存,6月有效。
4、切片用蒸馏水清洗3次,每次2min。
5、切片入10ml DAB孵育液(提前20℃温育),避光孵育20min,其间不断晃动。
6、切片入10ml DAB显色工作液(提前20℃温育),避光孵育20min,其间不断晃动。
7、漂洗:取10ml左右的1×DAB Wash buffer漂洗切片2-3次,每次5min。
8、贴片,载玻片用铬明矾明胶包被,室温空气干燥。
9、脱水、透明步骤按如下操作: ①蒸馏水 10s ②70%乙醇 10s ③95%乙醇 10s ④100%乙醇 2次,每次10s ⑤二甲苯 2次,每次2~5min。
10、中性树胶封片,显微镜下观察棕色反应。
注意事项:
1. 如果出现高的反应背景或沉淀,表明DAB底物反应过于强烈。
2. 所用器皿必须洁净,避免含有氧化剂或还原剂,否则会产生非特异性反应。
3. DAB显色液避免反复冻融,以免显色效率下降。
4. DAB增强剂注意密闭保存,否则显色效率下降。
5.本产品仅由于科研,严禁他用。
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