生化试剂"β-葡萄糖苷酶(β-GC)检测试剂盒(微量法100T/48S) "
价格 | ¥1080.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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基本参数
纯度 | / | 规格 | GMS029-100T/48S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂"β-葡萄糖苷酶(β-GC)检测试剂盒(微量法100T/48S) " |
名称 | 生化试剂"β-葡萄糖苷酶(β-GC)检测试剂盒(微量法100T/48S) " |
β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase, β-GC)试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
β-GC(EC 3.2.1.21)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化β-糖苷键水解,具有多方面生理作用:在纤维素的糖化作用中,β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖;β-GC水解萜烯类香气前驱体,使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味;β-GC能够水解植物体内野黑樱苷,释放HCN,从而防止昆虫取食。
测定原理:
β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。
组成:
产品名称
|
GMS029-100T/48S
|
Storage
|
提取液:液体
|
100ml
|
4℃
|
试剂一:粉剂
|
1瓶
|
-20℃
|
试剂二:液体
|
15ml
|
4℃
|
试剂三:液体
|
15ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入12ml蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
粗酶液提取:
1、或培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1ml提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、培养液、血清(浆)等液体样本:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称(μl)
|
测定管
|
对照管
|
试剂一
|
120
|
|
蒸馏水
|
|
120
|
试剂二
|
150
|
150
|
样本
|
30
|
30
|
充分混匀,放入37℃准确水浴30min后,立即放入95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变),8000g,4℃,离心5min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)
上清液
|
70
|
70
|
试剂三
|
130
|
130
|
充分混匀,室温静置2min后, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。
每个测定管需设一个对照管。
β-GC活力计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.00585x -0.0027;x为标准品浓度(nmol/ml),y为吸光值。
(1)按液体体积计算:
单位的定义:每ml样本每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC活性(nmol/min/ml)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷V样÷T
=56.98×(ΔA+0.0027)
(2)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(3)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W
(4)按或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.114×(ΔA+0.0027)
V反总:反应体系总体积,0.3ml;V样:加入反应体系中样本体积,0.03ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g; 500:细胞或总数,500万;T:反应时间,30min。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0039x -0.0027;x为标准品浓度(nmol/ml),y为吸光值。
(1)按液体体积计算:
单位的定义:每ml样本每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC活性(nmol/min/ml)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反总]÷V样÷T
=85.47×(ΔA+0.0027)
(2)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(3)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W
(4)按或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.171×(ΔA+0.0027)
V反总:反应体系总体积,0.3ml;V样:加入反应体系中样本体积,0.03ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g; 500:细胞或总数,500万;T:反应时间,30min。
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