生物试剂 Triton X-100细胞裂解液
| 价格 | ￥398.00/瓶 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000瓶 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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Triton X-100细胞裂解液
简介：
X-100细胞裂解液是一种经典的快速裂解细胞组织并获得蛋白的裂解液。所获PAGE电泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。Triton X-100、NaCl、Tris-HCl等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的讲解，为维持原有的蛋白间相互作用。作用原理是利用去污剂Triton X-100破坏脂质双分子层，溶解胞质和细胞膜，破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。不宜用Bradford法测定由Triton X-100 Lysis Buffer获得样本的蛋白浓度。
组成：
产品名称
|
PC008-100ml
|
PC008-500ml
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Storage
|
Triton X-100细胞裂解液
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100ml
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500ml
|
-20℃
|
说明书
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一份
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||
保存条件：
-20℃保存，一年有效
操作步骤(仅供参考)：
一)贴壁培养细胞
1、取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀，使PMSF终浓度为1mM。
2、去培养液，低速离心，弃上清。
3、按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解，通常裂解1～3s内，细胞就会被裂解。(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
4、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
二)悬浮培养细胞
1、取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液比例，加入Triton X-100 Lysis Buffer。
4、4℃离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
三)组织样本
1、取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀后，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。
4、按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。
5、步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充1～2min之内，以减少蛋白的降解。
6、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
7、进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1、去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减 少裂解液的用量。
3、如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难 裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。
5、裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。
6、细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。
7、本产品仅供科研使用，严禁它用。
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