缓冲溶液是包含弱酸及其共轭碱的水基溶液,由于缓冲液的化学性质,即使物质发生化学变化,缓冲液也可以将它的PH值(酸度)保持在几乎恒定的水平。缓冲液自然存在于血浆中,它保持血液PH值处于7.35-7.45之间。在有机系统中,天然缓冲液将PH值保持在一致的水平。但是在生物研究的过程中,必须通过缓冲液来保持PH值的不变。缓冲液种类繁多,Tris缓冲液是常用的生物缓冲液之一。
什么是Tris缓冲液?
Tris是三(羟甲基)氨基甲烷的缩写,这是一种常用于盐水中的化合物,因为它是等渗且无毒的,pKa为8.1,pH值介于7和9之间,因此Tris缓冲溶液也常用于一系列化学分析和生物研究中,包括DNA提取。重要的是要知道tris缓冲溶液中的pH值会随溶液温度而变化。
如何制备Tris缓冲液
制备Tris缓冲液非常简单,只准备以下材料
- 三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)
- 蒸馏去离子水
- 盐酸
步骤
1、首先确定您想要制作的Tris缓冲液的浓度()和体积。例如,用于生理盐水的Tris缓冲溶液从10到100mM不等。根据实验需求,通过将缓冲液的摩尔浓度乘以正在制作的缓冲液的体积来计算所需的Tris的摩尔数。(Tris的摩尔数=mol/LxL)
2、接下来,通过将摩尔数乘以Tris的分子量(121.14g/mol)来确定这是多少克Tris的克数=(摩尔)x(121.14g/mol)
3、将Tris溶解到蒸馏去离子水中,达到所需最终体积的1/3到1/2。
4、混入HCl(例如1MHCl),直到为您的Tris缓冲溶液提供所需的pH。
5、用水稀释缓冲液以达到所需的最终溶液量。