产品推荐
-
¥900元
辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒
-
¥280元
丙二醛(MDA)测试盒
-
¥750元
乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒 试剂盒
-
¥2300元
线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性测试盒 试剂盒
-
¥1200元
人白介素2受体 IL-2R ELISA Kit 试剂盒
上海优选生物科技有限公司
联 系 人:伍雅君 QQ交谈 (联系时,请说明是在全球塑胶网上看到的)
联系电话:핆率뀵-휨핆쑵툅뀵ꅸ뀵ꀙ
手机号码:뀵휨率뀵ꀙꍁ핆툅ꅸ
公司官网: http://13564795574.51pla.com
所在地区:上海市 上海市
主营产品: 生物技术,
扫一扫,加我微信
进入店铺-
长春碱含量检测 HPLC液相测定
¥150元
-
长春质碱含量检测 HPLC液相测定
¥150元
-
长春新碱含量检测 HPLC液相测定
¥150元
-
文多灵含量检测 HPLC液相测定
¥180元
-
甜菜碱含量检测 HPLC液相测定
¥150元
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
PEPC(EC4.1.1.31)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶,对三羧酸循环的运转起重要调节作用。
测定原理:
PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42- ,苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和 NAD+,在340nm测定NADH减少速率,计算PEPC活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 30 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:液体 10 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 8mL 蒸馏水充分溶解待用;现配现用;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解待用;现配现用;
试剂五:粉剂×1 支,4℃保存(临用前加入6.6ml稀释液);
试剂五:稀释液 10mL×1 瓶,4℃保存;
样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、将试剂一、二、三、四和试剂五工作液置于37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热5分钟。
3、加样表:
试剂名称(μL) |
测定管 |
试剂一 |
500 |
试剂二 |
150 |
试剂三 |
150 |
试剂四 |
95 |
试剂五工作液 |
95 |
样本 |
20 |
将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中,立即混匀,加样本的同时开始计时,340nm波长下记录初始吸光度A1和反应5分钟后的吸光度A2。计算 ΔA=A1-A2。
注意事项: 如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三、四、和试剂五工作液按比例配成混合液。
PEPC 活性计算:
1、血清(浆)PEPC 活力计算
单位定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PEPC(nmol/min/mL))=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=1624×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 PEPC 活力计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PEPC(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T
=1624×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PEPC(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=1624×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每1万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PEPC(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T
=3.248×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1.010×10 -3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.02 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:
反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
上海优选生物科技有限公司
联系人:
伍雅君
服务热线:
뀵휨率뀵ꀙꍁ핆툅ꅸ
핆率뀵-휨핆쑵툅뀵ꅸ뀵ꀙ
公司地址:
上海市浦东新区港澳路271号1幢2层
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)测试盒 试剂盒相关产品
猜你在找
免责声明:以上展示的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)测试盒 试剂盒信息由上海优选生物科技有限公司自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责,
全球塑胶网对此不承担责任。
风险防范建议:为保障您的利益,建议优先选择速购通会员
手机版:磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)测试盒 试剂盒
更新产品链接为:https://www.51pla.com/html/sellinfo/404/40408214.htm
发送询价单