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土壤铵态氮试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
土壤中的铵态氮可被土壤胶体吸附,呈交换性铵状态氮肥,也可溶解在土壤溶液中,能直接被植物吸收利用,属于速效性氮素。
测定原理
土壤中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,在 625nm处有特征吸收峰,吸光值与铵态氮含量成正比。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。
试剂组成和配制
提取液:液体 110mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×2 瓶,4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加4mL双蒸水溶解,现配现用。
试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 2mL×1 瓶,4℃保存。
样本处理
按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1g新鲜土样,加入1mL 提取液),振荡提取1h,10000g ,25℃离心10min,取上清液待测。
测定操作表
1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至625nm,蒸馏水调零。
2、操作表
空白管 |
测定管 |
|
样本(μL) |
20 |
|
提取液(μL) |
20 |
|
试剂一(μL) |
80 |
80 |
试剂二(μL) |
80 |
80 |
充分混匀,25℃静置 1h |
||
试剂三(μL) |
20 |
20 |
充分混匀,于微量石英比色皿/96孔板中,蒸馏水调零,测定625nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管 |
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y =0.3672x-0.0377,R2=0.9993
NH4+—N 含量(mg/kg)=(△A+0.0377)÷ 0.3672×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)
= 27.23×(△A+0.0377)÷W
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提
取液体积,1mL,W:样本质量,g
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.1836x-0.0377,R2=0.9993
NH4+—N 含量(mg/kg)=(△A+0.0377)÷ 0.1836×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)
= 54.46×(△A+0.0377)÷W
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提
取液体积,1mL,W:样本质量,g
注意事项
1. 试剂一必须避光低温保存,配制好的试剂一 4℃保存不能超过20天。
2. 浸提液最好在当日完成测定,如果不能完成,可冷冻保存,但不能超过两天。
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