A3161001澳洲胎牛血清

gibco 盒装澳洲血清 A3161001

 

Gibco胎牛血清使用方法

         在细胞培养过程中，经常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，最.常使用的Gibco胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果，我们在实验中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培养293T细胞，效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根据具体细胞选择合适的Gibco胎牛血清浓度。
 

 

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Gibco胎牛血清保存方法

1、需要长期保存的Gibco牛血清，例如Gibco南美胎牛血清，必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会被破坏，而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶,可将40～45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现Gibco牛血清有悬浮物,例如Gibco北美胎牛血清中发现有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。

3、瓶装Gibco胎牛血清南美解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

4、热灭活是指56℃, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。

5、血清中的沉淀物和絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。

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Gibco胎牛血清使用中遇到的常见问题总结

一、血清灭活问题。

 

1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？

 

答：不是必须的，看做什么实验了，我在使用Gibco南美血清10270106的时候，都不灭活。

 

2、问：Gibco胎牛血清新西兰（Gibco新西兰血清10091148）灭活是56℃ 30分钟吗？

 

答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，例如经常使用Gibco新西兰胎牛血清，是不用热灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。

 

3、问：我要做滋养细胞培养，Gibco北美胎牛血清要灭活吗？

 

答：一般的细胞培养中使用到的Gibco胎牛血清，例如Gibco ES专用胎牛血清是不用灭活的。如果一定需要灭活，可以直接购买Gibco胎牛血清澳洲热版本，进口Gibco澳洲胎牛血清热灭活的一般都已灭活。灭活的Gibco血清价格一般比未灭活的Gibco血清价格要高很多。

 

4、问：我用病毒上清转染细胞，培养用的血清需要灭活吗？因为血清中可能有些补体和抗体，是不是会影响转染？我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合，影响转染，正确吗？细胞是单核细胞白血病细胞，病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时，目的是什么？

 

答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。

 

5、问：(1)我买的是Gibco胎牛血清北美，要灭活吗？有些说法是需要，有些说直接解冻后就可以加入到培养基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有关系吗？

 

答：关于血清的热灭活，是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行，因为有两个作用，第.一是灭活补体，第二是灭活血清中可能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。

 

我在实验室处理Gibco胎牛血清新西兰的时候，有一次水浴箱在灭活过程中出现故障，温度升高到80℃，血清变成了凝胶状，我重新处理了另外一份Gibco胎牛血清南美，将两份血清对比，发现高温直接影响到血清所含的抗体蛋白。在56℃下灭活半小时以上，肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试，看看到底有多大的影响。热灭活之后，血清放在四度冰箱久了，就会有沉淀产生，这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染。为了验证到底有没有污染，常常又会把血清放置37℃温育，但是血清中的蛋白会进一步析出，最后还是要做镜检，无菌培养试验，和革兰氏染色试验，非常麻烦。

 

 

问：我现在在做人的外周血b淋巴细胞的培养，文献上要求用人的AB型血清，但是我觉得很多代理商都没有。我想FBS代替，但不知道可否，我先是担心免疫排斥之类，但是我查了些资料后，应该不会(我觉得)。但是我又不能够TRY。因为细胞因子确实太贵了，所以咨询一下。谢谢！

 

答：你最.好照文献的做。除非你系列实验证明你用代用品的结果与文献的相同(你还是要用到文献的试剂)。细胞培养的影响因素很多，特别是培养基的成分。

 

五、血清的制备方法问题。

 

1、问：我的实验需要自己制备一些血清用于培养细胞，有没有人知道用于培养细胞的血清需要怎样的制备过程？

 

答：自己制备血清当心污染啊，我们一般不自己制备胎牛血清，我们是购买的Gibco牛血清，Gibco新西兰血清10091148，效果非常好，也很稳定。如果无菌条件好的话，用静置析出方法就行。

 

2、问：一般我们用得Gibco胎牛血清用前还要灭活，我想用大鼠的血，不知道要不要灭活？

 

答：你直接把采来的血液在离心管里4℃过夜，离心，取上清，在无菌过滤，也可灭活，然后分装冻存，用时再配。

 

3、问：如果灭活会不会对血清中的一些因子有损伤？

 

答：加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。灭活一般不会对血清中的一些因子损伤的。

 

六、心肌细胞原代培养时Gibco牛血清的使用问题。

 

1、问：在进行心肌细胞原代培养时，需要用含血清的培养基中止胰酶的消化作用，我现在使用的是含血清10%的培养液，但近日看北医一个细胞培养的课件发现，有用1%血清培养液进行中止消化的，想问一下，1%的是否可以，效果是否有保证？这样确实能节省不少血清的。

 

答：关于心肌细胞元代培养的FBS问题：

 

(1)1%的血清完全培养基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌细胞元代培养就不行。 10%的FBS完全培养基效果都不太好，开始心肌细胞元代培养需要高浓度的FBS，20%左右，但这就有出现另一个问题，在FBS完全培养基中，成纤维细胞呈优势细胞，须得在培养基加入适量的BrdU以抑制其生长，纯化心肌细胞。

 

(2)FBS的作用不仅仅是拿来中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白质如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。

 

(3)元代心肌细胞培养的FBS使用，有讲究：刚开始使用20%左右的高浓度的FBS，后逐渐递减为无血清的DMEM/F-12培养基培养。

 

2、问：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的胶原酶。FBS要高浓度递减是否是说的在细胞培养中啊，难道在消化时终止也需要如此高的浓度吗，还有，我的BRDU只用到48小时就不用了，因为担心其损伤太大，可以持续用多久呢？

 

答：我用10%FBS终止的，然后差速1h，然后还是用10%FBS的HG-dmem养的，没有用brdu，心肌细胞还是比较多和稳定的，我第3天就可以用，第2天晚上看就会有搏动。

 

七、血清和培养基的种类及品牌问题。

 

1、问：细胞培养的胎牛血清用哪个公司的产品比较好呢？周围有人用PAA或Hyclone的，这两种跟Gibco或sigma出品的差别大吗？

 

答：如果是长得非常快得细胞如pa317，293，c6等恶性肿瘤细胞，一般得国产血清就可以，如果是原代培养的细胞，最.好应用胎牛血清或类标准胎牛血清，Hyclone公司血清的质量不如GIBCO(同类血清)。国产的杭州四季青和甘肃民海（中美和资）不错。有些细胞(如：sf9，293还有其他一些元代细胞)，用Gibco的比其他两种好很多，会大大加速试验进度。对于其他一些细胞(如：vero，MDCK，pk)四季青，Hyclone的小牛血清足矣！另外，Gibco的还要看产地，不同产地的Gibco血清价格不一样。在这些所有血清品牌中，Gibco血清价格较高，质量也比较稳定。

 

2、问：最近要订一瓶Gibco北美血清16000044，实验室之前都在用小牛血清，没有买过Gibco胎牛血清。请问哪个公司的好一些？问过试剂公司，有两种：一种是PAA的(分普通级和优级)，一种是Hyclone的(只有普通级，而且是新西兰产的)。试剂公司推荐使用PAA优级的，但看好多文献都用Hyclone的，公司说是因为现在Hyclone的都不是美国进口的了。请问用的哪种胎牛血清比较好？

 

答：民海的效果还不错，要是不放心国产的，那就买进口的。进口的好多公司都有，Gibco新西兰血清的效果很好。Hyclone和Gibco的都还可以。民海的似乎比四季青的要好些。复蒙的感觉也不错。

 

3、问：四季青“无噬菌体、低内毒素胎牛血清”与“无支原体胎牛血清”的区别？培养肿瘤传代细胞用哪一个比较好些？

 

答：用无支原体Gibco澳洲胎牛血清就可以啦。

 

4、问：SKBR-3细胞培养用哪种型号的1640培养基及胎牛血清？

 

答：我一直用GIBCO的1640，你可以买含HEPES的1*10L的包装，胎牛血清也是用的GIBCO，10%就行。

 

八、Gibco牛血清污染噬菌体的问题。

 

1、问：有谁知道小牛血清制造过程中怎样能够避免噬菌体的污染，以及对已污染噬菌体的牛血清怎样能够除去噬菌体？

 

2、问：我也想知道，我用的血清中大部分都有噬菌体，它对细胞培养到底有什么影响？

 

答：不知道您究竟使用的什么血清，我们使用的Gibco胚胎干细胞专用血清16141079，没有任何噬菌体。建议您立刻更换胎牛血清，推荐您使用Gibco胎牛血清，具体的产品货号是：Gibco南美胎牛血清（Gibco南美血清10270106）、Gibco北美胎牛血清（Gibco北美血清16000044）、Gibco澳洲胎牛血清（Gibco澳洲血清10099141）、Gibco新西兰胎牛血清（Gibco新西兰血清10091148）、Gibco ES专用胎牛血清（Gibco ES专用血清16141079）。

 

九、培养基血清浓度问题。

 

问：在1640里加血清时加多了，90ml里加了20ml Gibco新西兰血清10091148，约为18%，以前都是加10ml的，查了网上多建议用10%-15%，有关系吗？

 

答：我认为一般来说血清浓度的较大波动对细胞的状态影响较大，建议再加90ml1640调成10%。血清浓度大当然细胞状态感觉要好，但是高浓度的Gibco澳洲血清10099141可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果。10%的浓度培养鼻烟癌细胞很好。

 

十、问：MTT加药的时候加不加血清？加药时要用无血清的培养基吗？

 

答：成分会集中在棕颜色部分。

 

问：(2)为什么会出现棕色呢？

 

答：血清中的棕色多一些可能是因为红蛋白的含量高些的缘故吧。

 

问：(3)血清灭活之后可以存放吗？我的是前天灭活的，但是没有加到培养基里，而是放在冰箱里，那下次可以直接用吗？还是再次灭活啊？

 

答：当然可以，如果多的话，分装后最.好放在－20℃，下次用时再解冻，也不用再灭活。最.好用一管拿一管，少许血清可以放在4℃。分装时还要注意不要装得太满，以免溢出污染。

 

十五、污染和过滤的问题。

 

1、问：怀疑购买的Gibco胚胎干细胞专用胎牛血清（Gibco ES专用胎牛血清）染菌，想用滤膜过滤一下，可否自己用0.22μm滤膜过滤？对血清性质有多大影响？有做过的么？

 

答：可以过滤的，血清当出厂时都是0.22μm或0.1μm过滤除菌。想证明有没有染菌不用过滤这么麻烦，只要放置于37℃过夜就可以了，如果有微生物污染会变浑浊的，如果还是澄清的就说明没有问题的。实验室中血清很难直接过滤，一般要加到培养基中再过滤。我们实验室制备培养基时，都使用滤膜过滤，一般而言如果制备1-2瓶培养基，一个滤膜及一支30ml注射器可以过滤50ml小牛血清。如果大量制备培养基也可以将血清加到培养基中，使用0.22微米的大滤膜一起过滤。

 

2、问：我怀疑我用的完全1640培养液被污染了，准备重新过滤消毒，过滤后是否需要补充胎牛血清？如需又如何补充？

 

答：完全1640培养液被污染了，如果是支原体的话，过滤没有作用，支原体可以通过滤膜。我们用1640液，都是配液后保留500ml，然后其他的分装100-200ml，现用现配因为血清比1640要贵，如果你想过滤的话，建议你加原比例血清，因为Gibco牛血清不会很容易通过滤膜。最主要的还是找到可能污染的原因。

 

3、问：加好了Gibco牛血清双抗的培养基由于污染了再过滤后还能用吗？

 

答：建议不要用了。在加了双抗的情况下已经污染，那么细菌污染的可能性会较小了。一般的过滤除不能去除病毒或者部分真菌的污染的。

 

4、问：我准备把使用的完全1640培养液重新过滤一遍，不知道培养液中的血清成分是否能通过滤膜，过滤后是否还需要补充胎牛血清？如需又如何补充？

 

答：可以透过，但是随着液体量的增多会很慢，如果不加压会比较麻烦，还有最.好用低蛋白吸附的，不然损失是比较大的。

 

十六、问：悬浮细胞培养时能否加Gibco胎牛血清？如果加了会有什么结果？为什么悬浮细胞培养时就不能加Gibco血清？

 

答：血清是细胞培养基中重要的培养成份之一，对细胞生长有广泛影响。在细胞培养时，我们通常会加入10%的血清。血清的质量对细胞培养的成功至关重要。一般说来，牛血清包括以下成分：生长因子(如激素，白细胞介素等)，他们可以促进细胞生长；贴附因子，他们可以促进细胞的贴壁，往往只有细胞贴壁才能增值(悬浮培养的细胞除外)；蛋白质(如血清白蛋白，球蛋白等)，既可以作为营养物质，又可以中止胰酶的作用；还有很多成分不明的物质。血清还可以起到解毒作用，如脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性。血清还可以是细胞免受机械损伤。因此，无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，血清是必不可少的。除非因实验要求无血清培养时，例如：为使细胞同步化时，我们会采用无血清培养的。单纯的说悬浮细胞培养不能加Gibco胎牛血清就没有太多的道理了。

 

十七、关于中和消化液需要的血清量。

 

问：用胰蛋白酶消化细胞后，需要用血清中和。具体这种中和作用所要求的胰蛋白酶和血清之间的比例是多少？

 

答：做了很久的试验，真的没有想过胰酶和血清的对应关系。不过细想下来，这个应该也没有固定的比值。血清的品种、产地都是不同的，成分必然有差异，如何能确定其与胰酶的比值关系？我们消化细胞的时候，如果是传代，细胞变形后，吸出胰酶直接加入适量的hanks液或者全培，这个量看自己的喜好和吹打细胞方便而定。一般都可以中止消化的。不会存在继续消化的事情。如果是从组织上消化细胞做原代培养，我一般都使用全培进行中止，而且加的很多，0.25%的胰酶，用10%血清，按1:2的比例应该是足够的。当然全培是2，一般我养细胞的时候，会用国产的比较便宜的血清配制全培，专门用于中止消化，这样有几个好处：一是中止消化的效果应该好于hanks液吧，再是也有利于维持细胞活性。而且这部分液体会被离心去掉，血清便宜，离心掉了不会心疼。而养细胞的时候用好血清。个人观点，仅供参考。

 

十八、Gibco胎牛血清新西兰中的悬浮物问题。

 

1、问：发现培养的细胞瓶中背景有许多的小黑点，培养液中也有一些漂浮的物。看了之前的帖以为是胶原虫。本打算换液，换液前特意看了下前些天配的培养液，肉眼发现培养液中有悬浮的颗粒状物质(不多)，于是放在镜下观察，新鲜培养液中有一些悬浮的小颗粒，不多。(培养液是R1640 20%Gibco小牛血清 1%双抗)于是又将分装在4℃保存的小牛血清拿出观察，肉眼可见5、6个白色小小球状的物质，在血清瓶稍靠下的部位悬浮。镜下观察，也有少量的不知什么物质的东西漂浮。小牛血清是Hyclone新西兰的，标签上写已经经过2μm滤膜过滤处理。根据上述培养液的情况，是否说明培养液已被污染？如果是正常的血清是不是在镜下不应该看到杂物，哪怕是极少量的？根据上述血清的描述，是不是说明血清也存在问题，还能用吗？补充：细胞培养以来生长状态就不好。买血清的时候厂家说明不用灭活，所以未灭活。

 

答：(1)Gibco血清应该-20℃保存，解冻血清时，请按照的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大实验显示非常容易产生沉淀物。