转基因构建OTP增强子-CrylA基因PCR试剂盒50次

产品特点：

产品仅用于科研是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

HO-8910PM(人高转移卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2 颌下腺上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2,11-二硫杂[3.3]对环芳烷(>97.0%(HPLC))2,11-Dithia[3.3]paracyclophane质量规格：>97.0%(HPLC)

间充质干细胞成骨细胞分化培养基MODM1,6,20,25-四氮杂[6.1.6.1]对环芳烷(>98.0%(HPLC))1,6,20,25-Tetraaza[6.1.6.1]paracyclophane质量规格：>98.0%(HPLC)

KLRC1 Others Cynomolgus 食蟹猴 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-羟基左旋咪唑4-Hydroxy Levamisole质量规格：美国进口

人肾皮质近曲小管上皮细胞;HK-2氯米帕明N氧化物Clomipramine N-Oxide质量规格：美国进口

SUNE-1亚株6-10B细胞，人鼻咽癌细胞系 小鼠SRSV转化的3T3细胞,SRSV/3T3细胞 CM-H055人卵巢上皮细胞完全培养基100mLN-去甲基氯米帕明盐酸盐N-Desmethyl Clomipramine Hydrochloride质量规格：美国进口

PLAT Others Mouse 小鼠 tPA / PLAT 人细胞裂解液 (阳性对照) 羊藿苷F2质量规格：BR,美国进口Icariside F2

大鼠卵巢成纤维细胞完全培养基 100mL多韦替尼质量规格：>99%,BRDovitinib

Daudi人Butt's瘤细胞 Daudi human Butt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS乙酰黄芪皂苷I质量规格：HPLC≥98%Acetytastragaloside

IGFBP5 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IGFBP5 / IGFBP-5 蛋白 (His 标签)5-苯基-2,4-戊二1酸(标准品)质量规格：>98%,标准品5-Phenyl-2,4-pentadienoic acid

FO(小鼠骨髓瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠腹脊髓神经元RN-vsc蒙脱石（标准品）质量规格：鉴别Montmorillonit

Caki 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞植物血球凝集素shēng huà shì jì容量：25克

L929-EGFP-puro小鼠成纤维细胞 L929-EGFP-puro mouse fibroblast cells MEM(NaHCO3 1.5g/L,  Pyruvate 0.11g/L)+10%FBS+8ug/ml puromycin福美双 Tetramethylthiuram disulfide,97%  100G 通用试剂

NOG Protein Human 重组人 Noggin / NOG 蛋白

转基因构建OTP增强子-CrylA基因PCR试剂盒50次HMy2.CIR人B母细胞 HMy2.CIR human B lymphoblastoid cell IMDM培养基(GIBCO)+20%FBS弹性蛋白酶(猪胰)shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光10克

FGF9 Protein Canine 重组狗 FGF9 / FGF-9 蛋白 (Fc 标签)2 2 4 4-四溴联本迷 2,2',4,4'-TqTRcBROMODIPHqNYL qtqr 2436-43-1

A3(人T细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2 子宫癌组织源性原代细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)/1ml偶氮录膦Ⅲshēng huà shì jì容量：25克

人滑膜细胞cDNAHS cDNA十八1酸钠，英文名或英文缩写：wo7ium oleate，级别：超，99%，规格：5克

TNFRSF11A Others Rat 大鼠 TNFRSF11A 人细胞裂解液 (阳性对照) AmikacinSulfate 5g原装 INALCO1758-9312

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。