转基因构建Cry1Ac基因-NOS终止子PCR试剂盒50次

产品特点：

产品仅用于科研是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

NCI-H292(人肺癌细胞) 5×106cells/瓶×23,4,5,6-四氯荧光素3,4,5,6-Tetrachlorofluorescein质量规格：荧光染料

Promocell C-26001 Renal Epithelial Cell GrowthMedium , 肾上皮细胞生长培养基(即用型) 500ml赤藓红B(>95.0%(E))Erythrosine B质量规格：>95.0%(E)

间充质干细胞培养基MSCM-acf-prf4-正辛氧基苯(>98.0%(GC))4-n-Octyloxybenzaldehyde质量规格：>98.0%(GC)

PTPN2 Others Human 人 PTPN2 / TC-PTP (aa 1-314) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 4-十八烷氧基苯(>95.0%(GC))4-Octadecyloxybenzaldehyde质量规格：>95.0%(GC)

EB病毒转化的人B细胞;KM05014-丙氧基苯(>97.0%(GC))4-Propoxybenzaldehyde质量规格：>97.0%(GC)

PRL Protein Mouse 重组小鼠 PRL / Prolactin 蛋白 (His 标签)米诺地尔（标准品）质量规格：含量测定Minoxidil

人胚胎膀胱组织来源细胞;CCC-HB-2 人肺动脉成纤维细胞完全培养基 100mL7-羟基-4-甲基（标准品）质量规格：≥97%,标准品7-Hydroxy-4-methylcoumarin

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-D27-羟基-4-甲基质量规格：≥97%,BR7-Hydroxy-4-methylcoumarin

LAIR1 Others Mouse 小鼠 LAIR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 十一酸睾酮（标准品）质量规格：含量测定Testosterone undecanoate

人胰腺星状细胞完全培养基 100mL邻香兰素(>98%,BR)质量规格：>98%，BRo-Vanillin

GAD2 Others Mouse 小鼠 GAD65 / GAD2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1-奈乙二，英文名或英文缩写：N-(1-Naphthyl)etxylenediamine，级别：CP，97%，规格：100毫克

人原胚肾转化细胞;293 Ad5氧化铜丝 Coppqr oxidq;Coppqr Monoxidq;Blcck coppqr oxidq 1317-38-0

Jurkat,Clone E6-1细胞，T细胞白血病细胞 人鼻咽癌细胞系,SUNE-1亚株13-9B细胞 CL-03

转基因构建Cry1Ac基因-NOS终止子PCR试剂盒50次人肝细胞;HL-7702[L-02]核黄素-5-嶙酸钠盐二水物，英文名或英文缩写：FMN-Na，级别：ACS，98%，规格：5克

ENPEP Others Mouse 小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 5，7，4’-三羌基皇同(-20℃) cpigqnin 20-36-2

CL-0310VE(人血管内皮细胞)5×106cells/瓶×2CHLORIDE,ANxy7noUS录化,无水高级白色薄片RTsigma

RGC-5, 小鼠视网膜神经节细胞 人单核细胞型瘤，THP1细胞 GC-2spd(ts)(小鼠精母细胞)录亚明T，英文名或英文缩写：Chloramine T trihydrate，级别：超，99%，规格：100毫克

绿色荧光蛋白标记人胃癌细胞;MGC803-GFPAgarose,TypeA 100g Spannish原装

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。