转基因元件adh1启动子PCR试剂盒50次

服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品特点：

是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：产品仅用于科研

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

Hut-102细胞，人T瘤细胞系 Walker氏癌肉瘤256瘤株,W256细胞 人小气道上皮细胞裂解物HSAEpiCL迷迭香酸（标准品）Rosmarinic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品

NCI-H226(人肺鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2绵马贯众素ABBA(标准品)Dryocrassin ABBA质量规格：HPLC≥98%，标准品

Caov-3(人乳突状卵巢腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0070CRFK(猫肾细胞)5×106cells/瓶×2 615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM7552’-脱氧鸟苷;2'-dG2'-Deoxyguanosine monohydrate质量规格：>98%,BR

狗间充质干细胞-脂肪DMSC-ad2‘-脱氧胞苷2'-Deoxycytidine;2'-dC质量规格：>98%,BR

DUSP3 Others Human 人 DUSP3 / VHR 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 2‘-脱氧胞苷(标准品)2'-Deoxycytidine;2'-dC质量规格：HPLC>98%,标准品

MDCK(犬肾细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CRELD2 人细胞裂解液 (阳性对照) 5,7-二氯-8-羟基喹哪啶;氯喹那多质量规格：>98%,BRChlorquinaldol

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A癸氧喹酯;乙癸氧喹酯质量规格：>99(T)Decoquinate

DCLK1 Others Human 人 DCAMKL1 / DCLK1 (aa 1-705) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (S)-2-氨基-5-甲氧基四氢萘盐酸盐 质量规格：>98%(S)-2-Amino-5-methoxytetralin Hydrochloride

CL-0057CCL-149(大鼠肺泡上皮细胞)5×106cells/瓶×2巴马司他;BB94质量规格：>98%,MMP(基质金属蛋白酶)抑制剂Batimastat(BB-94)

U266B1 [U266], 人多发性骨髓瘤细胞 骨肉瘤细胞,Saos-2细胞 CFPAC-1(胰腺癌细胞)头孢克1(标准品)质量规格：>98%,标准品Cefixime

EB病毒转化的人B细胞;KM9803银丝shēng huà shì jì容量：2～8℃1克

TSPAN7 Others Human 人 TALLA-1 / TSPAN7 人细胞裂解液 (阳性对照) 1，4-丁 2-Butynq-1,4-diol 110-62-6

CL-0408NEC(人食管癌细胞)5×106cells/瓶×2硬脂酸丁酯，英文名或英文缩写：TECH，级别：AR，99%，规格：1克

HepII细胞，猴肾细胞 人白血病阿霉素耐药株,K562/Adr细胞 人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38

转基因元件adh1启动子PCR试剂盒50次小鼠条纹神经细胞(MN-s)(1×106)1,2,3,5-Tetra-O-acetyl-β-D-ribofuranose四乙酰核糖10毫升，98%

狗肾细胞;Super Tube杜邦制冷剂 1,1,1,2-Tqtrcfluoroqthcnq 811-97-

小鼠T瘤细胞(鸡OVA基因修饰);E.G7-OVA 小鼠胎儿真皮成纤维细胞完全培养基 100mL炳二晴 99% Mclonic ccid 141-8-

CHO, 中国仓鼠卵巢细胞系 其它2-硝基本-α-D-半乳糖苷，英文名或英文缩写：ONPG，级别：共轭级,4500u/mg,小牛肠,芬末，规格：1克

TNFRSF9 Others Human 人 4-1BB / CD137 / TNFRSF9 人细胞裂解液 (阳性对照) 148-24-38-羟基;8-氢氧化;8-羟基氮(杂);邻羟基氮(杂)8-xy7noxyinoneoline;Oxyinoneoline;Oxine;inoneopxenol;8-inoneolinone;xy7noxybenzopyridine;Oxybenzopyridine;pxenopyridine;Oxy

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。