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17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA 试剂盒

价格 1500.00/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 1000盒

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基本参数

品牌 语纯生物 规格 48T/96T
种属 大鼠,小鼠,人源 保存温度 2-8℃
产品说明 仅供科研使用

上海语纯生物ELISA试剂盒优质供应商,详情请搜索语纯生物商城查找相关产品(www.yuchunbio.com)

ELISA实验标本的采集、处理和保存

R&D elisa试剂盒样本处理及要求

1.  血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
2.  血浆EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

 

R&D elisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材

1. 酶标仪(450nm

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

 

elisa试剂盒试剂盒组成

 

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12×8

12×4

标准品

0.3mL*6

0.3mL*6

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1

  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

 

R&D elisa试剂盒注意事项

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置

 

R&D elisa试剂盒试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

2洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

 

R&D elisa试剂盒操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL

3.  样本孔待测样本50μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物AB50μL37℃避光孵育15min

7.  每孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

实验结果计算

所测标准品的OD为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程将样品的OD值代入方程,计算出样品浓度

 

能够应用ELISA 实验的样本种类很多,有血清,血浆,细胞上清,细胞裂解液,尿液,关节滑液,脑脊液,肺泡灌洗液,各种组织的组织匀浆;采集和处理的方式都不相同。下面就列出了biotnt 收集的给类样本的采集、处理和保存方式。方法大多出自文献和试剂盒说明书,部分方法经Biotnt 验证过,但有的方法并没有实际操作过,所以,以下方法仅供参考。

 

 

一、ELISA实验中血清的采集、处理和保存;

1、 真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中;

2、 采血后室温静置1小时;

3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。

4、 取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

5、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。 

大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的 ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染,因为菌体中可能含有含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜 时检测。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。

 

二、ELISA实验中血浆的采集、处理和保存;

1、 真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中;

2、 1:9加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠),30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集);

3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心5min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。

4、 取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

5、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。 请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求,建议使用EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。

注意事项:制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA,抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。

 

三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存;

1、 采集尿液样本500ul,加入无菌试管中;

2、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。

3、 取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

4、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。

 

四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存;

1、采集脑脊液样本,加入无菌试管中;

2、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。

3、取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。

 

五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存;

1、采集细胞培养上清液500ul,加入无菌试管中;

2、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。

3、取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。

 

六、ELISA 实验中细胞裂解液的采集、处理和保存;(需要测蛋白浓度)

1、 取细胞培养板或细胞悬液,PBS(PH7.2-7.4)洗涤细胞培养板1-2次。

2、 通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂(裂解液),使细胞破坏并放出细胞内成份。

3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心20min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。

4、 取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

5、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。

 

七、ELISA 实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存;

1、 10%水合氯醛溶液,腹腔麻醉。

2、 打开腹腔,另取10ml注射器行下腔静脉采血,尽可能将血放尽。

3、 在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5ml,分三次灌洗:2ml1.5ml1.5ml灌洗。回收率在70%以上。

4、 肺泡灌洗液用离心机4℃,1500rpm离心10min。

5、 取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

6、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。

 

八、ELISA 实验中关节滑液的采集、处理和保存;

1、 口腔关节:患者取坐位,常规消毒后,作皮下及关节后区局部浸润麻醉。然后嘱患者大张口,采用装有2ml生理盐水的注射器(5号针头)作关节上腔 穿刺,髁后进针,针尖方向斜向前、内、上,抵达关节结节后斜面后稍后退,回抽如发现有淡黄色液体,即表明已进入关节上腔,注入2ml生理盐水,反复注入、 回抽五次。

   膝骨关节滑液:无菌穿刺取得关节液。

2、 关节液用离心机4℃,1500rpm离心15min,将离心好的匀浆留上清弃下面沉淀。

3、 取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

4、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。

 

九、 ELISA实验中各类组织匀浆(容易匀浆的组织)的采集、处理和保存;(需要测蛋白浓度)

1、 采集组织在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,剔除附属的结缔组织,称取组织块。

2、 用移液管量取0.1M PBS或者用0.86%冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍,用眼科小剪尽快剪碎组织块(天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织 的小烧杯放入冰水中)。

3、 匀浆的方式有多种: 

a) 手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(68分钟),充分研碎,使组织匀浆化。

b) 机器匀浆:用组织捣碎机1000015000r/min上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10/次,间隙30秒,连续35次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

4、 将制备好的10%匀浆用离心机4℃,3000rpm离心15min,将离心好的匀浆留上清弃下面沉淀。

5、 取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

6、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。

 

十、ELISA实验中各类组织匀浆(不易匀浆的组织)的采集、处理和保存;(需要测蛋白浓度)

7、 采集组织在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,剔除附属的结缔组织,称取组织块。

8、 用移液管量取0.1M PBS或者用0.86%冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍,用眼科小剪尽快剪碎组织块(天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织 的小烧杯放入冰水中)。

9、 匀浆的方式有多种: 

a) 手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(68分钟),充分研碎,使组织匀浆化。

b) 机器匀浆:用组织捣碎机1000015000r/min上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10/次,间隙30秒,连续35次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

c) 超声粉碎:用超声粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用40安培,5/次,间隙10秒反复35次。

10、 将制备好的10%匀浆用离心机4℃,3000rpm离心15min,将离心好的匀浆留上清弃下面沉淀。

11、 取上清。 分装冻存备用,

2-8℃下,可放置保存24-48小时;

-20℃下,可放置保存1个月;

-70℃下,可放置保存6个月;

12、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。


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